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本发明公开了一种稀土比率荧光探针的制备方法及其Cu2+检测应用,属于环境检测技术领域。以鲁米诺(luminol)和单磷酸鸟苷(GMP)为双配体,以稀土离子Tb3+为发光中心离子,通过luminol、GMP和Tb3+之间的自聚合配位作用,建立luminol‑Tb‑GMP荧光探针制备方法。luminol‑Tb‑GMP荧光探针兼具luminol和Tb3+的双荧光信号,在同一激发波长下同时发射luminol和Tb3+的双荧光信号。当Cu2+存在时,luminol和GMP对Cu2+有强配位作用,阻止了电子由GMP的氨基向Tb3+传递,导致Tb3+的荧光猝灭,而luminol的荧光强度则不变,建立基于luminol和Tb3+的荧光信号比率的Cu2+检测方法。此外,随着Cu2+浓度的增加,Tb3+的绿色荧光逐渐减弱,而luminol的蓝色荧光逐渐显现,据此还可实现对Cu2+的可视化检测。luminol‑Tb‑GMP荧光探针还可应用于环境水样和生物样品中Cu2+的灵敏检测。