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本发明公开一种生物素修饰稀土掺杂无机荧光纳米颗粒的制备方法。利用苯并三氮唑-N,N,N′,N′-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU)以及N,N-二异丙基乙胺(DIEA)为活化剂,在无水N,N-二甲基甲酰胺的溶剂中,将生物素的羧基进行活化,然后与纳米颗粒的氨基反应形成酰胺键,从而实现稀土掺杂无机荧光纳米颗粒表面的生物素修饰。采用本方法制备的生物素修饰稀土掺杂无机荧光纳米颗粒可与亲和素进行迅速而稳定的连接,同时由于纳米颗粒内掺杂的稀土离子特定发光可以对这一连接进行灵敏的响应,表明了通过这一制备方法得到的纳米材料应用于生物标记和免疫分析领域的潜力。