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本发明公开了一类发光纳米粒子与其制备方法及应用。此类发光纳米粒子由含羧基高分子化合物基质材料和分散在所述基质材料中的稀土发光染料构成;本发明提供的制备发光纳米粒子方法,包括将稀土配合物发光染料和高分子化合物溶解于能与水混溶的有机溶剂中,将上述溶液加入水中,利用共沉淀-自组装过程形成所述发光纳米粒子。本发明提供的发光纳米粒子具有优异的长波激发发光性能、良好的稳定性以及可用于偶联生物分子的表面羧基。基于此类发光纳米粒子的生物探针, 在高灵敏发光免疫分析以及生物成像等方面具有广阔应用前景。