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本实用新型公开了一种牛结核杆菌免疫层析检测试纸条,包括底板,在所述底板一侧上按层析方向依次叠合有第一样品垫、第一结合垫、第一层析膜、第一吸水垫,所述第一结合垫上包被有稀土荧光纳米颗粒-金黄色葡萄球菌A蛋白偶联物;所述第一层析膜上设有包被有结核杆菌CFP10蛋白、ESAT-6蛋白、MPB70蛋白中任一种的第一检测线及包被有温血动物IgG的第一质控线。该牛结核杆菌免疫层析检测试纸条具有良好的特异性和灵敏度,且简单易操作可快速检测的检测动物牛结核杆菌感染,还具有多用性及灵活性的优点,而且价格便宜适于较多现场使用。