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本发明公开了一种荧光生物标记多微孔板自参考量化检测方法,属于荧光标记生物检测技术领域。解决了现有荧光标记生物量化检测需要另设参考信号源且标准样易变,导致量化精度低,易受环境影响且检测成本高的技术问题。本发明的荧光生物标记多微孔板自参考量化检测方法是在多微孔板中掺杂稀土铥离子,并以稀土铥离子在685nm处的荧光发射光谱的荧光信号强度作为待测物的荧光信号强度的标准参考信号强度。本发明将多微孔板与仪器系统结合,无需另外设计标准信号参考源和相应的光路,简化仪器结构,降低成本,使用掺杂的稀土铥离子的荧光信号强度为标准参考信号强度,提高了荧光生物标记多微孔板量化分析检测的稳定性、精确度和准确性。