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本发明公开了用于检测有机溶剂中水含量的含上转换荧光纳米材料的检测试纸条及其制备方法和检测方法。所述检测试纸条包括试纸条基材以及负载在试纸条基材上的上转换荧光纳米材料,所述试纸条基材为滤纸、玻璃纸、无纺布、纤维素膜或淀粉膜,所述上转换荧光纳米材料为聚乙烯亚胺表面功能化的稀土上转换纳米荧光材料PEI‑NaBiF4 : Yb3+/Er3+。本发明利用有机溶剂中水含量不同导致上转换荧光熄灭程度不同,在检测试纸条上显示出不同亮度的绿色光斑,从而实现对水含量的测定,方法操作简单方便,对水分测定范围广,进行样品检测时不需对样品进行特别处理。