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本发明提供了一种时间分辨荧光检测方法,把特异反应体系的一株生物原料包被在磁珠上,将包被生物原料的磁珠与被测样本反应,清洗后加入另一株已标记β-二酮类稀土配合物的特异性生物原料,发生免疫反应,使磁珠、被测样本和荧光示踪物形成复合物,清洗后再加入荧光增强物,最后用时间分辨荧光仪检测,获得被测样本的浓度等信息。本方法可实现时间分辨荧光法半自动、全自动系统(即随机系统)检测,能解决解离增强镧系元素荧光免疫分析技术的不足之处,提高时间分辨荧光分析法的应用和推广。