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本发明公开了一种稀土配合物荧光探针对DNA的测定方法,包括以下步骤:将六次甲基四胺-盐酸缓冲溶液、Tb3+溶液、环丙沙星水溶液和DNA溶液混合,加水定容,摇匀并放置10~30min,作为供试液;另外,除了不添加DNA溶液其它均同供试液的操作配制空白液;在激发波长为280~300nm,发射波长为540~550nm,激发狭缝宽度和发射狭缝宽度均为5~15nm处,测定空白液和供试液的荧光强度F0和F,DNA荧光强度ΔF=F-F0。本发明方法所用的试剂毒性很小,是对环境友好的荧光探针,且操作简单,能够快速、准确地进行DNA测定,具有高的灵敏度与好的选择性,应用范围广泛。