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本申请实施例属于荧光免疫层析技术领域,涉及一种定量检测cTnT/NT‑proBNP/D‑dimer的试剂盒及其应用,包括检测卡,检测卡包括卡壳和试纸卡,试纸卡包括PVC底板,PVC底板上设置有样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜以及吸水纸;结合垫上吸附有稀土Eu3+荧光微球分别标记的抗心肌肌钙蛋白T、抗N末端心房利钠肽、抗D二聚体三种单克隆抗体以及稀土Eu3+荧光微球标记的羊抗鸡IgY抗体;硝酸纤维素膜上设有第一检测线、第二检测线、第三检测线和质控线,第一检测线处包被有D‑dimer单克隆抗体,第二检测线处包被有cTnT单克隆抗体,第三检测线处包被有NT‑proBNP单克隆抗体以及质控线处包被有鸡IgY抗体,实现能够一次取样而同时快速、准确地定量检测cTnT、NT‑proBNP、D‑dimer。