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本发明公开了一类多色发光的稀土配合物功能化的介孔二氧化硅纳米球的制备方法及其细胞成像应用。其主要包括以下步骤:首先制备出介孔二氧化硅纳米球,再加入3-氨基丙基三乙氧基硅烷对介孔二氧化硅表面进行功能化,而后利用2-(溴噻吩基)咪唑并[4, 5-f][1, 10]菲咯啉对上述功能化的介孔纳米球进行改性,最后加入稀土二元配合物,利用配体交换反应将稀土配合物共价嫁接到介孔二氧化硅纳米球中,在一定条件下反应制得最终产物。本发明方法制备工艺简易、产率高,合成的介孔纳米球材料不仅尺寸均一、结构稳定,且具有荧光强度较高、比表面积较大、基本无毒性、发光可覆盖450-1700nm的光谱区域等优点,并成功用于细胞荧光成像。