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本发明公开了一种介孔直接包覆的荧光多功能纳米生物探针的制备方法,其包括以下步骤:首先,以稀土掺杂上转换发光纳米晶为核,用阳离子表面活性剂(十六烷基三甲基溴化铵)将疏水性上转换纳米晶转换为亲水性;而后,将亲水性上转换纳米晶分散在水、乙醇和氨水混合溶液中;随后在碱性条件下滴加硅源,硅源水解并在静电作用下自组装到上转换纳米晶表面形成介孔荧光多功能纳米球;最后去除模板剂,即得到介孔直接包覆的荧光多功能纳米生物探针。本发明的方法制备工艺更简易、生产效率更高,合成的介孔纳米球形材料不仅尺寸均一、结构稳定,并且具有上转换荧光强度较高、比表面积较大等优点,可应用于上转换荧光成像、靶向载药等生物医学领域。