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本发明公开了一种基于时间分辨荧光法和DNA杂交的大肠埃希氏菌检测方法。根据大肠 埃希氏菌DNA目标序列设计了捕获探针DNA1和识别探针DNA2，捕获探针DNA1固定标记在玻璃片 上；识别探针DNA2联接长寿命发光稀土铕配合物。当DNA1与DNA2串联时能够与目标DNA(即待 测生物的DNA)发生碱基互补的杂交反应；构建了基于普通玻片表面两探针串联的DNA检测模 型。将长寿命发光的稀土铕配合物作为识别探针DNA2的标记物，利用时间分辨荧光的方法能 有效消除生物体系内源荧光和固体基质背景光的干扰。本发明检测方法用时短，反应结果直 观、灵敏、准确，具有十分显著的优点。