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本发明公开了一种猪繁殖与呼吸综合征抗体的免疫荧光定量检测试剂盒及其使用方法。由试纸卡、稀释液和标准品组成,所述试纸卡是在PVC板上顺次相互搭接样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫组成,所述硝酸纤维素膜上包被有作为检测线的重组PRRSV衣壳蛋白(N蛋白)和囊膜糖蛋白(GP5蛋白)的混合物和作为质控线的羊抗鼠IgG抗体,所述结合垫上包被有稀土荧光微球标记的抗猪IgG单克隆抗体。本发明公开的检测试剂盒采用间接法实现血清中抗体水平的定量检测,检测抗原采用自制的重组N蛋白和重组GP5蛋白混合液作为抗原池,与单一抗原作为检测抗原相比,灵敏度显著提升。与传统的ELISA相比,其特异性、灵敏度、重复性及稳定性较高。