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本发明公开了一种基于磁微粒的时间分辨荧光免疫检测方法,包括将特异性的抗原或抗体包被在磁珠上,形成免疫磁珠;将聚氨基多羧基与稀土离子形成的螯合物标记特异性的抗原或抗体,形成荧光标记物;加入样本,发生免疫反应,使免疫磁珠、被测样本和荧光标记物形成复合物,清洗后再加入荧光增强物,使用解离‑增强技术使荧光值增强百万倍,最后检测,获得被测样本的浓度等信息。本发明可同时检测一份或多份样本、并且一次实验可检测多个指标、操作简便快速。检测灵敏度、检测重复性和灵活性要远远好于传统微孔板式TRFIA和层析方法。