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本发明涉及一种心肌肌钙蛋白I和N‑端脑利钠肽前体二合一测定试剂盒及制法,设有试纸卡,其特征在于所述试纸卡由下至上依次设有:PVC板、样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫,其中结合垫上吸附有稀土Eu3+荧光微球分别标记的抗心肌肌钙蛋白I、抗N‑端脑利钠肽前体两种单克隆抗体‑微球偶联复合物,所述稀土荧光微球的直径为150nm,稀土荧光微球含稀土镧系元素Eu3+,在基态下稳定,在337nm的激发光源作用下发射出波长615nm的荧光;所述单克隆抗体为纯化后混合的单克隆抗体,分别均来源于针对2‑6个不同的心肌肌钙蛋白I、N‑端脑利钠肽前体抗原表位的单克隆抗体细胞株。具有操作简便、反应快速、灵敏度高、特异性强等优点。