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检测膜蛋白内化的方法

2025-06-17 22:323440下载
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一种对目标跨膜蛋白的内化进行检测的方法,所述跨膜蛋白在细胞表面表达,所述方法包括以下步骤:a)用荧光金属复合物标记所述目标蛋白,所述荧光金属复合物的寿命大于0.1ms;b)向反应介质中加入能够引起所述目标蛋白内化的组合物;c)向反应介质中加入调节剂,所述调节剂选自:a.与所述荧光金属复合物相配的荧光FRET受体化合物或非荧光FRET受体化合物,所述FRET受体化合物在反应介质中的终浓度大于10-7M;b.还原剂,其氧化还原电位小于+0.1V,优选为0.25-0.75V;c.与所述荧光金属复合物通过非共价的键合作用特异性结合的试剂;d.金属离子,所述金属离子与稀土金属竞争以形成非荧光金属复合物;d)当所述化合物是荧光受体化合物时,在所述荧光金属复合物的发射波长和/或所述调节化合物的发射波长下,测定反应介质所发出的光;e)将步骤d)中测定的信号与仅经历步骤a)和c)的细胞上测定的参比信号进行比较。用途:对膜蛋白内化进行检测的方法。


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